氯霉素（CAP）ELISA检测试剂盒标准操作流程详解

为确保检测结果的准确性和可重复性，使用氯霉素（CAP）ELISA检测试剂盒需严格遵循标准化操作流程。以下为通用型操作步骤，具体细节请以随附说明书为准。

一、实验前准备

1. 试剂平衡：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温（20–25℃）放置30分钟，使所有组分恢复至常温，避免冷凝水影响反应效果。
2. 试剂配制：根据说明配置洗涤液（通常为浓缩液稀释）、样本稀释液及其他工作液，确保无沉淀或结晶。
3. 样品处理：采集待测样本（如牛奶、蜂蜜、组织匀浆等），按规范进行提取、净化与离心，取上清液作为待检液，必要时进行适当稀释。

二、加样与孵育

1. 加标准品与样本：在预包被抗体的微孔板中，分别加入不同浓度的标准品和处理后的样本各50μL，每组建议设双孔平行。
2. 加酶标二抗：每孔加入50μL酶标记物，轻拍混匀，避免产生气泡。
3. 温育反应：将微孔板置于恒温箱中，37℃孵育30–60分钟（时间依说明书而定），期间避免阳光直射。

三、洗涤与显色

1. 洗板：孵育结束后，使用自动或手动洗板机，以洗涤液充分冲洗微孔5次，每次注满并停留30秒，最后一次拍干残留液体。
2. 加显色剂：每孔加入显色剂A液和B液各50μL，避光静置10–15分钟，控制显色时间一致。
3. 终止反应：加入50μL终止液，溶液颜色由蓝色转为黄色，立即进入读数环节。

四、数据读取与分析

1. 吸光度测定：使用酶标仪在450nm波长下测定各孔OD值，建议在终止反应后30分钟内完成读数。
2. 标准曲线绘制：以标准品浓度为横坐标，对应平均OD值为纵坐标，进行线性回归或四参数拟合，生成标准曲线。
3. 样本浓度计算：根据样本OD值在标准曲线上查得相应浓度，并乘以稀释倍数，得出原始样本中目标物质含量。

五、注意事项

• 所有试剂使用前摇匀，避免污染；
• 不同批次试剂不可混用；
• 实验器具应清洁干燥，避免交叉干扰；
• 废液应按实验室规定妥善处理。

严格按照上述流程操作，有助于提升检测数据的可靠性与实验室间可比性。