人内啡肽（Endorphin, EP）是一种重要的神经肽类激素，参与调节疼痛感知、情绪、应激反应及免疫功能。在科研或临床前研究中，常通过ELISA试剂盒对其在血清、血浆或脑组织匀浆等样本中的浓度进行定量检测。为确保结果准确可靠，实验过程中需特别注意以下关键事项：
1. 样本采集与处理
内啡肽易受应激、运动、昼夜节律等因素影响，采样时间应尽量统一，并避免剧烈活动后立即取样。血清或血浆样本需在采集后2小时内离心（建议2000–3000 rpm，15分钟，4℃），分装后立即冻存于–80℃，避免反复冻融（建议不超过2次），以防蛋白降解。
2. 试剂盒选择与保存
选用高特异性、经验证适用于人源样本的EP ELISA试剂盒，注意查看交叉反应数据（如与β-内啡肽、脑啡肽等的区分能力）。试剂盒应按说明书要求于2–8℃避光保存，使用前将所有组分平衡至室温（约30分钟），避免温差导致非特异性结合。
3. 实验操作规范
严格按照说明书加样，标准品需现配现用并充分混匀；样本若浓度过高，应进行预实验确定合适稀释倍数。洗板步骤至关重要，确保每孔洗涤充分（通常5次，每次300–400 μL洗液），避免残留导致背景升高。显色反应需严格控制时间，避免过显色影响OD值线性。
4. 数据分析与质控
标准曲线相关系数（R2）应≥0.99，否则需重做；设置空白孔、标准孔和复孔样本，确保重复性（CV值<10%）。若样本OD值超出标准曲线范围，应重新稀释检测。
综上，规范的样本管理、严谨的操作流程与严格的质量控制，是获得准确人内啡肽ELISA检测结果的关键。
