人钙调素（Calmodulin, CAM）作为细胞内重要的钙离子感受器，其表达水平与多种生理病理过程密切相关。采用ELISA法进行定量检测是科研中的常用手段。为确保结果准确可靠，需严格遵循标准化操作流程。
一、样本采集与处理
血清样本采集后需室温静置30分钟，3000×g离心10分钟，取上清；血浆样本推荐使用EDTA或肝素抗凝，采样后立即离心分离；细胞上清需清除碎片，组织样本则需匀浆后离心取液。所有样本应避免反复冻融，建议分装后于-80℃保存，检测前在冰上缓慢解冻。
二、试剂准备与加样
检测前将试剂盒各组分平衡至室温（15–30℃）。标准品用稀释液梯度配制，形成标准曲线点。待测样本根据预实验结果决定是否稀释。加样时先加标准品和样本（通常100μL），后加入酶标二抗，注意避免交叉污染，充分混匀后封板。
三、温育与洗板
按说明书要求进行温育（通常37℃孵育1小时）。温育结束后使用洗板机或手动洗板，以洗涤液充分冲洗反应孔5次，每次拍干，确保未结合物质彻底清除。
四、显色与终止
加入显色底物（TMB）避光反应15–30分钟，随后加入终止液终止反应，溶液呈黄色。
五、数据读取与分析
使用酶标仪在450nm波长测定各孔吸光度（OD值），参考波长可选630nm校正。以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线，采用四参数拟合或线性回归计算样本中CAM浓度，再乘以稀释倍数获得原始样本浓度。
全程需设置复孔以评估重复性，并纳入质控样本监控实验稳定性。规范操作是获得可靠数据的关键。建议参看产品操作说明。
