ELISA检测各类样本前处理标准流程
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一、通用核心原则
1. 严禁溶血、浑浊、脂血，会直接导致OD值偏高/偏低、假阳性。
2. 避免反复冻融，最多冻融1次，否则蛋白降解指标失真。
3. 所有样本处理后必须离心取清亮上清，弃沉淀再上机/送检。
4. 处理全程低温、尽量快速，减少蛋白降解。
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二、血清样本（最常用）
1. 全血常温静置30～60min自然凝固。
2. 3000r/min 离心 15min。
3. 小心吸取上层清亮淡黄色血清，不要吸到下层血细胞。
4. 分装小管，-20℃/-80℃保存，备用检测。
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三、血浆样本
1. 采血加入抗凝管（EDTA/肝素，按试剂盒要求选）。
2. 轻柔颠倒混匀，不要剧烈震荡。
3. 3000r/min 离心 10min。
4. 吸取上层清亮血浆，分装冻存。
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四、细胞上清液
1. 细胞培养到设定时间，收集培养液。
2. 2500r/min 离心 10min，去掉细胞碎片。
3. 取上清即可直接用于ELISA，无需稀释（按说明书）。
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五、组织样本（肝、肾、肺、肠道等）
1. 预冷PBS冲洗组织，去掉血污。
2. 按比例加预冷裂解液/PBS，剪碎后冰上匀浆。
3. 高速低温离心，取上清液。
4. 上清可直接测或按比例稀释后检测。
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六、尿液样本
1. 收集新鲜中段尿。
2. 低速离心去除杂质、沉淀。
3. 取清亮上清，部分指标需稀释后检测。
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七、关键注意点
1. 溶血样本直接报废，不能测，数据完全不准。
2. 样本浑浊、有絮状物，一定要再次离心过滤（可用玻璃纤维过滤）。
3. 竞争法ELISA对前处理要求更高，必须去杂质、去脂血，否则标准曲线做不出来。
4. 样本分装小体积，一次一管，杜绝反复冻融。
