精博生物
产品名称:猪低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA检测试剂盒

精博生物特色服务:ELISA免费代测 (本公司提供专业技术服务,生化,PCR,WB,液相等实验外包等检测服务)

广州同城可免费上门取样,外地客户可直接快递寄送样本(特殊样本需按照样本保存方式处理包装)

精博生物产品规格(1):48T 可做42个样本(留6个标曲)

精博生物产品规格(2):96T 可做90个样本(留6个标曲)

实验前准备与步骤

猪低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA检测试剂盒

试剂盒检查：
确认试剂盒在有效期内，一般保质期为 6 个月。检查试剂盒内各组分是否齐全，包括微孔板、标准品、检测抗体 - 酶结合物、洗涤缓冲液等，避免因缺少试剂影响实验进程。
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猪低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA检测试剂盒
设备与耗材准备：
准备酶标仪（波长需涵盖试剂盒检测波长，如 450nm、630nm ）、恒温培养箱（温度控制精度 ±0.5℃ ）、移液器（量程覆盖 1 - 1000μL ）及配套吸头。实验耗材需保证无菌、无酶残留，否则可能产生非特异性结合，导致假阳性结果。
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猪低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA检测试剂盒

样本处理：
根据检测要求处理样本（如血清、血浆、细胞培养上清等）。血清样本需在采集后及时分离，4℃条件下离心 10 - 15 分钟（转速 2000 - 3000rpm ），去除细胞成分；血浆样本需使用合适的抗凝剂，如 EDTA、肝素等，防止样本凝固影响检测。加样标准品稀释：按照试剂盒说明书，将标准品进行倍比稀释，一般设置 5 - 7 个浓度梯度 ，如 0ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL 等，用于绘制标准曲线。标准品稀释需准确，误差应控制在 ±5% 以内。样本与对照加样：在微孔板中加入样本、阴性对照和阳性对照，每孔加样量通常为 50 - 100μL 。加样时需避免交叉污染，更换吸头，确保结果可靠。
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猪低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA检测试剂盒

温育与洗涤温育反应：

加样后，将微孔板放入恒温培养箱中温育，一般在 37℃条件下温育 30 - 60 分钟 。温育使抗原 - 抗体充分结合，温度和时间需严格控制，偏差过大可能影响结合效率，导致检测结果不准确。洗涤操作：温育结束后，弃去孔内液体，每孔加入 200 - 300μL 洗涤缓冲液 ，静置 1 - 2 分钟后甩干，重复洗涤 3 - 5 次 。洗涤可去除未结合的物质，减少背景干扰，若洗涤不充分，背景值会升高，影响结果判读。检测抗体 - 酶结合物添加与反应加酶结合物：每孔加入检测抗体 - 酶结合物 100μL ，轻轻振荡混匀，使酶结合物均匀分布。

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猪低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA检测试剂盒

二次温育：
再次将微孔板放入 37℃恒温培养箱中温育 30 - 60 分钟 ，让酶结合物与抗原 - 抗体复合物充分结合。洗涤：重复步骤 3 中的洗涤操作，C底去除未结合的酶结合物。显色与终止反应显色：每孔加入显色剂 A、B 各 50μL ，轻轻振荡混匀，在 37℃避光条件下显色 15 - 20 分钟 。显色剂中的底物在酶的催化下发生显色反应，颜色深浅与样本中待测物含量呈正相关。终止反应：加入终止液 50μL ，终止酶促反应，此时溶液颜色由蓝色变为黄色。
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猪低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA检测试剂盒
结果分析读数：
在酶标仪上读取各孔在 450nm 波长处的吸光度（OD 值），部分试剂盒需在 630nm 波长处读取作为参比波长，以校正背景。绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制标准曲线。一般采用四参数 logistic 模型拟合，相关系数 R2 需大于 0.98 ，表明标准曲线拟合良好。计算样本浓度：根据样本的 OD 值，从标准曲线上计算出样本中待测物的浓度。若样本 OD 值超出标准曲线范围，需对样本进行稀释后重新检测。
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猪低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA检测试剂盒

以上就是 ELISA 试剂盒的使用步骤。若你还想了解不同类型 ELISA（如间接法、夹心法）的操作差异、实验常见问题解决方法，欢迎随时和我交流。

温馨提示：试剂盒开封后需一个月内用完,以免影响效果。

精博生物部分ELISA指标：

人α2抗纤溶酶 α2-AP ELISA试剂盒	Human α2-Antiplasmin,α2-AP ELISA试剂盒
人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 NAG ELISA试剂盒	Human N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG ELISA试剂盒
人L苯丙氨酸解氨酶 PAL ELISA试剂盒	Human L-Phenylalanine ammonla-lyase,PAL ELISA试剂盒
人5核苷酸酶 5-NT ELISA试剂盒	Human 5-Nucleotidase,5-NT ELISA试剂盒
人1,3-βD葡葡糖苷酶 1,3-βD-Glu ELISA试剂盒	Human 1,3-βD glucosidase,1,3-βD-Glu ELISA试剂盒
人肌酸激酶 CK ELISA试剂盒	Human Creatine Kinase,CK ELISA试剂盒
人靶向核糖核酸酶 TR ELISA试剂盒	Human targeted ribonuclease, TR ELISA试剂盒
人蛋白激酶C PKC ELISA试剂盒	Human protein kinase C,PKC ELISA试剂盒
人醛缩酶 ALD ELISA试剂盒	Human Aldolase,ALD ELISA试剂盒
人L-乳酸脱氢酶 L-LDH ELISA试剂盒	Human L-Lactate Dehydrogenase,L-LDH ELISA试剂盒
人酸性神经鞘磷脂酶 ASM ELISA试剂盒	Human acid sphingomyelinase, ASM ELISA试剂盒